### 人前列腺癌细胞VCAP培养说明书

#### 一、细胞培养条件

对VCAP细胞的成功培养至关重要，确保细胞在适宜的条件下生长，以保持其活性和特性。

#### 二、细胞收到后的处理

当您收到VCAP细胞时，请首先用75%酒精喷洒整个细胞瓶，以实现表面消毒。随后，请将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱内静置3-4小时，以稳定细胞状态。此后，可通过显微镜观察细胞的生长情况。在此阶段，建议在40x、100x及200x下各拍摄一张细胞照片，用于售后依据。如未提供照片，将默认细胞状态良好。

在传代过程中，建议将一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，便于进行对比实验。换液后，请将瓶盖稍微松开，以确保气体交换。

#### 三、细胞培养步骤

**a、细胞传代：**

1. 若细胞匀合度未超过80%，请将完全培养液收集至离心管中，保留5ml，置入37℃、5%CO2的培养箱内培养。
2. 当细胞密度超过80%时，可进行传代，具体步骤如下：
    ① 弃去培养上清，使用不含钙镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
    ② 添加0.25%胰蛋白酶周液约1-2ml，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况；大部分细胞变圆脱落后，轻轻敲打培养瓶，加入5ml以上的完全培养基终止消化。
    ③ 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，添加1-2ml完全培养基重悬。
    ④ 按1:2的比例将细胞悬液分瓶转移（两个T25瓶），补充新鲜完全培养基至5-8ml/瓶，并放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。

**b、细胞冻存：**

1. 当细胞生长覆盖培养瓶80%面积时，废弃培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶约1ml至培养瓶中，观察细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打，使细胞脱落，转移至15ml离心管中，及1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞并加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。
4. 将冻存管直接置于-80℃冰箱保存。如需转入液氮罐，需在-80℃冰箱存放24小时以上再转移。

**c、细胞复苏：**

1. 从液氮中取出冻存管（穿戴好防护面具），快速放入37℃水浴中解冻，直到冻存管无结晶后，喷洒75%酒精于外壁消毒。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，轻轻重悬细胞于5ml完全培养基中，并接种至T25培养瓶，放入37℃、5%CO2细胞培养箱继续培养。
4. 第二天，使用新鲜完全培养基继续培养。

#### 四、注意事项

在运输过程中，某些细胞可能会因为粘附性差而易于脱落，这是正常现象。若脱落较多，请收集培养液至离心管并进行1000RPM离心5分钟，沉淀后加入胰酶进行处理。随后，按照传代步骤进行细胞分瓶。

#### 五、售后条款

1. **细胞问题的重发情况：**
    1. 运输过程中的细胞丢失、损坏或培养液漏液导致的情况，将重发。
    2. 若细胞受到污染，请在收到产品48小时内提供有效的实验结果，经核实后将重发。
    3. 在常温发货的细胞静置24小时后，或干冰发货的细胞复苏后24小时大部分细胞未存活（需提供照片），将重发。
    4. 对于收到的细胞在静置后或验证过程中发现的污染问题，也将重发。
    5. 细胞活性问题需在7天内提交实验结果，经验证后可重发。
    6. 收到细胞当天及次日、第三天拍照，如未告知，将视为合格。

2. **不予重发的情况：**
    1. 客户自行造成的细胞污染，不予重发。
    2. 不当操作导致细胞状态不良，不予重发。
    3. 未使用推荐培养体系造成的状态不良，不予重发。
    4. 若未在三天内提交细胞培养照片，亦不予重发。
    5. 装置处理不当所引发的问题，将不予重发。
    6. 在收到的两天内未告知的，不予重发。
    7. 具体情况将另行酌情处理。

**人生就是博-尊龙凯时**，我们期待您的细胞实验取得成功，并为您提供更好的技术支持与服务！