研究背景

Olink邻位延伸分析（Proximity Extension Assay, PEA）技术非常适合对来自人类和小鼠模型的类器官、iPSC、细胞系和条件培养基进行高质量多重蛋白质分析。PEA技术的基本原理是通过两个与寡核苷酸偶联的抗体同时结合在靶蛋白的邻近位点，从而使得寡核苷酸能够杂交并形成独特的DNA模板，这一模板随后可通过qPCR进行扩增和检测。PEA技术在各类样本基质中表现出色，所需样本量仅为1μL，这使得研究人员能够从人类和动物细胞系获取重要的见解，支持包括CRISPR基因编辑研究在内的多种应用，同时确保数据质量不受影响。

肠上皮细胞（IEC）由于其高增殖率，易受到化疗引致的损伤，而这种肠上皮损伤又会影响T细胞的行为，但具体机制尚未明晰。本研究使用基于人类肠道类器官的损伤模型，探讨化疗引起的肠上皮损伤对T细胞行为的直接影响。通过对化疗损伤和未处理类器官培养基进行PEA蛋白组学分析，指导后续利用CRISPR的机制研究。化疗后类器官培养基的蛋白组学分析为后续的CRISPR实验提供信息，以评估间质损伤诱导的T细胞活化机制。

Gal-9被认为是肠道损伤和炎症的潜在生物标志物，并可能成为抑制损伤、预防治疗的靶点。后续研究使用抗Gal-9阻断抗体或CRISPR/Cas9介导的Gal-9敲除，成功防止了肠道类器官损伤导致的T细胞增殖、干扰素-γ释放及迁移，为免疫治疗干预提供了新的策略。此外，蛋白组学分析为CRISPR研究提供了重要的疾病分子。

品牌优势

现代流行病学研究指出，大麻使用与心血管疾病（CVD）风险相关，然而其作用机制尚不清楚。Δ9-四氢大麻酚（Δ9-THC）作为大麻中的主要精神活性成分，其通过与血管中的大麻素受体1（CB1/CNR1）结合，可能与CVD有关。最新的英国生物样本库（UKB）数据分析显示，大麻用户的心肌梗死风险显著高于非使用者。通过Olink蛋白组学的Target96炎症面板，发现与动脉粥样硬化和心血管疾病风险相关的细胞因子和趋化因子的水平显著上升。

计算机模拟研究还表明，染料木黄酮（存在于大豆中的一种异黄酮）能够与CB1受体结合并抑制其活性。通过使用人类诱导多能干细胞衍生的内皮细胞，研究人员模拟了Δ9-THC诱导的炎症与氧化应激。采用siRNA、CRISPR干扰及染料木黄酮的方式，研究团队成功减弱了Δ9-THC的影响，为心血管疾病的预防提供了潜在的新视角。

伴放线菌聚集杆菌（Aactinomycetemcomitans）是导致牙周病的主要病原体，它会引发强烈的免疫反应，助长疾病的进展。NLRP3炎症小体则被认为与牙周病的发展密切相关，但其在感染期间如何调节免疫反应仍不清楚。研究者们调查了炎症小体相关蛋白caspase-1、caspase-4和NLRP3在放线菌聚集杆菌感染过程中对牙龈上皮细胞免疫反应的调节作用。通过CRISPR/Cas9技术创建缺乏NLRP3、caspase-1或caspase-4的人类牙龈上皮细胞（Ca9-22），并通过PEA对这些细胞在感染后的蛋白组学分析，精确评估其效应。

结果显示，与NCTC9710菌株相比，JP2菌株HK1651诱导的IL-1β和IL-1RA的释放量明显更高，且更易导致上皮细胞死亡，这一过程依赖于caspase-1、caspase-4和NLRP3。通过对Olink Target96炎症面板中炎症相关蛋白的分析，研究确认在HK1651感染后，相较于未刺激的Cas9和NLRP3缺陷细胞，37种蛋白的表达显著改变。

本研究不仅结合CRISPR基因编辑和蛋白组学分析，深入探讨了NLRP3在伴放线菌聚集杆菌感染中的作用，还进一步巩固了NLRP3作为调节伴放线菌聚集杆菌感染期间的免疫反应关键因素的观点。

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