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新手指南:快速了解Cre-LoxP系统与人生就是博-尊龙凯时的生物医疗应用

发布时间:2025-03-16   信息来源:尊龙凯时官方编辑

Cre-LoxP系统是一种基于位点特异性重组的先进基因编辑技术,其核心由Cre重组酶和LoxP位点构成。Cre重组酶(Cyclization recombination enzyme)是一种来自噬菌体P1的38kDa DNA重组酶,由343个氨基酸组成,能特异性识别LoxP位点的特定DNA序列,介导两个LoxP位点之间的DNA重组。

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LoxP位点是一个由34bp序列构成的特定DNA模块,包含两个13bp的反向回文序列和一个8bp的中间间隔序列。这些反向回文序列是Cre重组酶的特异性结合位点,而中间序列则决定了LoxP位点的重组特异性。Cre-LoxP系统的主要优势在于其高效性与精准性,能够在活体生物中实现基因的定点敲除、插入、翻转和易位等复杂操作。自20世纪80年代末首次被描述以来,Cre-LoxP系统在基因功能研究、疾病模型构建和神经科学等领域得到了广泛应用。

Cre-LoxP系统的工作机制可简单描述为:当基因中存在LoxP位点且Cre重组酶存在时,Cre重组酶会识别LoxP位点两侧的反向重复序列,并形成二聚体。随后,这些二聚体结合,形成四聚体,进而切割LoxP位点之间的DNA序列,最终通过DNA连接酶修复,完成重组过程。根据LoxP位点的方向和位置,Cre酶可实施多种基因操作:当两个LoxP位点同向时,Cre可以删除其间序列;当两个位点反向时,可以进行序列翻转;若两个LoxP位点位于不同的DNA链或染色体上,可以诱导易位;而在四个LoxP位点互相配置情况下,Cre则可以推进序列互换。

随着Cre-LoxP系统的不断发展,科学家们对其进行了多项优化和改良,开发出包括Lox2272、Lox511、Lox5171、LoxN等变体,以提高其在不同生物体及条件下的应用效率和特异性。例如,LSL(LoxP-Stop-LoxP)系统即是在目标基因上游插入由LoxP位点围绕的终止盒,待Cre重组酶介入后,会解除目标基因的转录阻断,从而实现特定条件下的基因表达。

此外,FLEX(Flip-Excision)和DIO(Double-Floxed Inverted Orientation)系统则分别允许基因片段的双向调控和稳定的基因表达控制。这些系统在转基因小鼠模型中得到了广泛应用。研究人员利用AAV病毒注射Cre重组酶,实现了基因的高效敲除与表达调控,为深入研究生物医学领域提供了强有力的工具。

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