人生就是博-尊龙凯时的实验室为您提供大鼠成纤维样滑膜细胞（FLS）培养的全面指导，旨在帮助您高效地进行细胞培养和应用。本文将详细介绍细胞的培养条件、处理步骤及注意事项。

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠成纤维样滑膜细胞（FLS）

生长特性：贴壁生长

冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：DMEM + 10% FBS + 1% 双抗

传代方法：第一次建议以1:2的比例进行传代，每两天更换培养液。

备注：请使用无菌离心管收集培养基，必要时可考虑使用我们的完全培养基进行对比培养。

二、细胞收到后处理

收到细胞后，将其培养至良好状态后，灌满完全培养液并密封瓶口，这是一种理想的运输细胞方法。使用75%酒精对细胞瓶表面进行消毒后，放入超净台内进行无菌操作。接着，将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以确保细胞状态稳定，然后进行后续处理。请在显微镜下观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片保存（建议40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片可作为重要的售后依据，若未提供照片则默认细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

若细胞未超过80%汇合度，收集培养液于离心管中，保留5ml完全培养基继续培养。如果汇合度超过80%，可按照以下步骤进行传代：

1. 弃去培养上清液，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态。若细胞大部分变圆并脱落，及时终止消化，加入5ml完全培养基。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落，转移悬液至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，重悬于1-2ml完全培养基中。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2的培养箱中培养。

b、细胞冻存

1. 细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，让细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使其脱落，转移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清后，沉淀细胞并加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀，转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱存放，如需转入液氮罐，请在-80℃冰箱存放24小时以上后再转移。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管，迅速置于37℃水浴中解冻，直至无结晶后，用75%酒精擦拭外壁。
2. 将细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，用5ml完全培养基重悬细胞，并接种至T25培养瓶，至37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。
4. 第二天更换新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，一些细胞可能会因为贴壁不牢而脱落，这是正常现象。如果脱落情况较多，请按以下方法处理：将培养液收集于离心管，1000RPM离心5分钟，收集上清作过渡培养，随后加胰蛋酶进行消化，终止反应后按上述方法传代培养。

五、售后条款

若出现细胞问题，重发的情况包括：运输途中造成细胞丢失、瓶身破损等；细胞污染，需在48小时内提供真实结果；常温发货后细胞未存活等。对于不予重发的情况，主要包括客户导致的细胞污染、操作不当等。若有任何疑问，请及时与我们联系，我们将竭诚为您服务。

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